視網膜血管網鋪片PAS染色實驗檢測

服務介紹：

視網膜血管網鋪片PAS染色（Periodic Acid-Schiff Stain）是一種用于觀察視網膜血管網絡形態和結構的組織化學染色方法。PAS染色可以特異性地染色血管基底膜和糖原等碳水化合物成分，使血管網絡清晰可見，常用于研究視網膜血管的發育、病理變化以及糖尿病視網膜病變等疾病。

染色原理：

單獨剝取眼球視網膜，用胰-酶消化去除視網膜內細胞只保留血管網，將血管網均勻地鋪在載玻片上進行PAS染色。PAS染色又稱過碘酸雪夫染色。一般用來顯示糖原和其它多糖物質。過碘酸能使細胞內的多糖乙二醇基氧化成二醛，再與Schiff氏液的無色品紅結合呈現紫紅色，復染蘇木素，細胞核呈藍色。毛細血管基底膜含有大量糖類物質，經PAS染色后呈現紫紅色，進而將血管網的形態結構染出來。

實驗步驟：

1、取材與固定：剝取眼球，使用4%多聚甲醛固定一段時間（如大鼠眼球固定12小時以上，整顆眼球4%PFA固定24小時以上）。

2、剝離與消化：剝離出視網膜，并使用胰-酶等消化液去除視網膜內細胞，只保留血管網。

3、吹打與鋪片：將消化后的視網膜血管網進行吹打，去除粘附在血管網上的細胞，直至血管網呈現透明狀。然后，將透明的視網膜血管網鋪展在載玻片上。

4、PAS染色：晾干的血管網鋪片浸入自來水中5分鐘。取出切片，稍甩干多余的水分，切片入0.5%高碘酸浸染15分鐘，切片入純水浸洗3次，每次10秒。稍甩干切片多余的水分，切片浸入已經提前恢復常溫的雪弗溶液中于暗處浸染20分鐘。取出切片，浸入裝有自來水的塑料盆中流水沖洗5分鐘，稍甩干切片多余的水分，入蘇木素染液染色5分鐘，自來水洗，鹽酸水溶液分化2秒，自來水洗，氨水水溶液返藍5秒，自來水洗。切片入無水乙醇3缸脫水，各5分鐘，二甲苯透明5分鐘，中性樹膠封片。

5、觀察與評估：染色完成后，通過顯微鏡觀察視網膜血管網的形態結構，并進行評估。

染色結果：

視網膜毛細血管經PAS染色后呈現紫紅色（或紅色），細胞核呈藍色。閉鎖毛細血管細胞核消失，且管腔萎-縮變細呈細線狀。

視網膜血管網鋪片PAS染色實驗檢測

僅供科研實驗用，不做其他用途！